毛細(xì)管電泳儀是根據(jù)在電解質(zhì)溶液中,帶電粒子在高壓電場(chǎng)作用下,以不同的速度定向遷移的現(xiàn)象來(lái)達(dá)到組分分離的目的。各組分分離后通過(guò)檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè),并根據(jù)各組分的遷移時(shí)間和響應(yīng)值進(jìn)行定性、定量分析。電泳的支持物是彈性石英毛細(xì)管。儀器主要由高壓電源、進(jìn)樣器、毛細(xì)管柱、檢測(cè)器、數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)等幾部分構(gòu)成。
由于受毛細(xì)管內(nèi)總體積的制約,對(duì)于濃度很稀的樣品,毛細(xì)管電泳儀不能象HPLC那樣可加大進(jìn)樣量來(lái)提高檢測(cè)靈敏度,但可采取一些措施來(lái)改善。
1.當(dāng)樣品緩沖液的電導(dǎo)明顯低于(100倍以上)電泳緩沖液時(shí),毛細(xì)管兩端加上電壓后可在樣品區(qū)帶前后形成一個(gè)更大的電場(chǎng),使樣品溶液中的分子遷移的更快。當(dāng)這些分子到達(dá)電泳緩沖液邊界時(shí),由于電場(chǎng)減弱,遷移速度減慢,使樣品區(qū)帶由寬變窄,濃度提高,而達(dá)到濃縮的目的。
2.當(dāng)樣品緩沖液和電極緩沖液的電導(dǎo)一樣,而樣品濃度較稀,不適合再作稀釋時(shí),可在進(jìn)樣前先吸入一些水,也能達(dá)到濃縮的目的。無(wú)論采取何種進(jìn)樣方式,上述方法都可使樣品堆積濃縮。但由于在堆積區(qū)帶電勢(shì)陡降,會(huì)導(dǎo)致此區(qū)帶溫度升高。
3.毛細(xì)管插入樣品溶液后,應(yīng)立即開(kāi)始進(jìn)樣操作,完成后迅速移至緩沖液中開(kāi)始電泳。否則會(huì)產(chǎn)生毛細(xì)作用和虹吸現(xiàn)象,引起誤差并使譜帶展寬。
4.電極不要和毛細(xì)管接觸,樣品貯器和緩沖液貯器液面的高度應(yīng)保持平衡。
5.使系統(tǒng)盡可能保持恒溫。因溫度直接影響粘度,而影響進(jìn)樣量的恒定。
6.樣品溶液中的溶劑必須與緩沖液互溶,前者的離子強(qiáng)度應(yīng)低于后者。
7.防止樣品溶液和緩沖液蒸發(fā)、損耗。