毛細(xì)管電泳儀(以下簡(jiǎn)稱儀器)是根據(jù)在電解質(zhì)溶液中,帶電粒子在高壓電場(chǎng)作用下,以不同的速度定向遷移的現(xiàn)象來(lái)達(dá)到組分分離的目的。各組分分離后通過檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè),并根據(jù)各組分的遷移時(shí)間和響應(yīng)值進(jìn)行定性、定量分析。電泳的支持物是彈性石英毛細(xì)管。
毛細(xì)管電泳儀每次運(yùn)行間毛細(xì)管的清潔處理:
·在相同實(shí)驗(yàn)條件下每個(gè)樣品之間的沖洗步驟應(yīng)只以運(yùn)行緩沖液沖洗為佳,避免NaOH、水等物質(zhì)的沖洗。
·緩沖液沖洗的時(shí)間一般為2-5min,如果重復(fù)性不佳,可提高沖洗壓力或延長(zhǎng)時(shí)間來(lái)嘗試提高實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性。
·若以上步驟還是難以達(dá)到理想的實(shí)驗(yàn)重復(fù)性且出現(xiàn)每次出峰時(shí)間的后移情況,則是因?yàn)闃悠分形镔|(zhì)在毛細(xì)管內(nèi)壁的吸附所引起,此時(shí)則需要使用0.1M NaOH的沖洗,沖洗時(shí)間為2min左右,以去除毛細(xì)管內(nèi)壁上的吸附物,此后再用水和運(yùn)行緩沖液較長(zhǎng)時(shí)間沖洗,以確保緩沖液與毛細(xì)管內(nèi)壁之間的平衡穩(wěn)定形成。
·對(duì)于使用SDS或CTAB等表面活性劑的實(shí)驗(yàn),需要注意這些表面活性劑與毛細(xì)管表面之間的平衡對(duì)實(shí)驗(yàn)重復(fù)性是至關(guān)重要的。所以此類實(shí)驗(yàn)一般不采用NaOH洗毛細(xì)管,而是采用緩沖液的長(zhǎng)時(shí)間沖洗和預(yù)電泳來(lái)提高實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性。當(dāng)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行到一定次數(shù)以后再用NaOH米清潔毛細(xì)管,并用運(yùn)行緩沖液長(zhǎng)時(shí)間沖洗獲得平衡。
毛細(xì)管插入樣品溶液后,應(yīng)立即開始進(jìn)樣操作,完成后迅速移至緩沖液中開始電泳。否則會(huì)產(chǎn)生毛細(xì)作用和虹吸現(xiàn)象,引起誤差并使譜帶展寬。
毛細(xì)管電泳儀使用操作:
1.電極不要和毛細(xì)管接觸,樣品貯器和緩沖液貯器液面的高度應(yīng)保持平衡。
2.使系統(tǒng)盡可能保持恒溫。因溫度直接影響粘度,而影響進(jìn)樣量的恒定。
3.樣品溶液中的溶劑需要與緩沖液互溶,前者的離子強(qiáng)度應(yīng)低于后者。
4.防止樣品溶液和緩沖液蒸發(fā)、損耗。